便携型现场快速PCR检测仪的研制
生物恐怖的阴影笼罩全球，烈性传染病也时有发生，对其进行快速检测和快速诊断能为采取相应的处理措施和治疗争取时间，对社会意义重大。目前对生物战剂的检测和诊断，主要还依赖于后方实验室。在现场快速检测和快速诊断方面，国内尚未制式装备配备军队，国外虽有开发，但还存在以下明显问题：注重了检测速度，但是特异性不强；要求了特异性，又因所能检测的种类太少不能满足需求；同时，检测或诊断人员的安全性问题也一直没有解决。成功开发能够满足高通量、高速度、高灵敏、高特异、高安全检测需求的现场快速检测方法或装备是解决以上问题的关键。
针对生物战剂的检测，能满足高速度、高灵敏、高特异需求的技术目前仅有核酸检测和蛋白检测两种。核酸检测针对的是特定生物战剂的特异核酸片段，现有的PCR检测技术可以做到，仅需拥有生物战剂的核酸序列信息；蛋白检测针对的是特定生物战剂的特殊蛋白，现有的免疫检测技术可以实现，但需要生物战剂的蛋白方面的信息和相应的单克隆抗体。当前基因组研究发展迅速，而蛋白质组研究相对滞后，单克隆抗体种类远远不能满足需求，因此对生物战剂的快速检测和快速诊断还只能选择核酸检测。
PCR检测和诊断技术具有高速度、高灵敏、高特异的特点，如果能实现现场快速检测，还能满足高通量的需求，同时也能解决检测和诊断人员的安全性问题。但是，几个“瓶颈”限制了PCR技术现场(自动化)快速检测的应用，这包括：标本的预处理过程中的离心和影响反应酶活性的变性剂的引入、高通量检测过程中的微量加样和自动化控制、反应结果判读所需的凝胶电泳步骤等。对这些“瓶颈”的疏通对解决生物战剂的现场快速检测问题具有重要意义。
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主要结果
1. 我们在未经标本预处理的条件下从菌液中扩增出了目的核酸片段。这为我们建立简便、快速、适合野外操作的PCR扩增体系提供了实验基础。
2. 未经标本预处理的条件下，我们对噬菌体(病毒)、带有pUC18质粒的DH5α菌株(细菌)等原核生物细胞及真核生物细胞(人A549细胞)目的核酸片段都能有效扩增。分别对以三蒸水、生理盐水、尿液、血液等不同溶液稀释的带有pUC18质粒的DH5α菌株的菌液中的目的核酸片段都能有效扩增，其扩增灵敏度依次为三蒸水>生理盐水>尿液>血液。
3.与国产的淋球菌PCR快速检测试剂盒作对比，我们的扩增效果更加良好，检测灵敏度有一定提高。
4. 简化加样操作步骤，使检测时只需再加适量模板，对检测结果并无明显不良影响。
5. 能够用于直接多重PCR快速检测，同时检测多个目的核酸片段。
6. 采用特异性荧光标记技术，可直接判读扩增结果。
结论：
1. 有效解决生物战剂现场PCR快速检测“瓶颈”中的标本预处理问题。
2. 验证了对噬菌体、细菌等原核细胞和真核细胞中目的核酸片段的扩增能力。
3. 验证了对不同溶液稀释的菌液标本的扩增能力，实验结果表明以三蒸水和生理盐水为溶解体系，该直接PCR扩增体系能保证高灵敏、高特异检测。
4. 与现有的国产淋球菌快速PCR检测试剂盒相比，我们至少可获得相同的特异检测灵敏度，而且还大大简化了操作步骤，减少了人为污染造成的假阳性情形的发生，使结果更为可信。
5. 验证了进行多重PCR扩增的能力，这样可同时检测多种目的核酸片段。
6. 扩增特异性主要通过引物设计保证。本实验中所使用引物均为自行设计，在设计时严格要求，故在全部电泳结果中，条带出现指示有效扩增，结合marker，大小则与预期相吻合；如对有些标本扩增效果不佳，则条带暗淡甚至无明显条带；但不会出现非特异扩增、引物二聚体等杂带的干扰。引物设计适当，能够保证该直接PCR系统用于检测的高特异性。
7. 在本研究的基础上，完全能够开发基于直接多重PCR检测技术的便携式生物战剂现场快速检测装置。
8. 在本研究的基础上，结合现有的互联网基因组信息(保证特异性)、标本采集富集系统(保证高灵敏)、多重PCR技术(保证高通量)、实时荧光定量PCR技术(保证结果判读与其他部分的耦合)、和目前国内发展迅速的“中国芯”技术(自动化控制)，以我国现有的已经比较强大的制造加工能力，开发我国生物战剂现场PCR自动化快速检测系统的条件已经基本具备。
关键词：现场快速检测；PCR自动化；
自然人，硕士学历，本科毕业于5年制军事医学院校，后从事遗传学、分子生物学、现场快速诊断学研究。
现已退伍，人生目标：生活充实，家庭幸福，实实在在做点事情。
本研究为军事医学研究成果，但是由于生物战剂遗传物质序列库的保密性，暂时难以研制开发我国生物战剂现场PCR自动化快速检测系统。而发表论文和申请专利又存在泄密的可能，故寻求资金和单位合作开发民用掌上型现场快速PCR检测仪。
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为避免技术流失，仅与中资机构合作
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至于成功合作后的市场开发以及销售，还请合作者联系准备。以前专心科研，社会关系网络尚未建立起来。
利益分配方面好说，可只占有25-30%的股份。
有合作意向请联系biosummit@yahoo.com.cn，生物颠峰，你我同行。
There is no royal road to science ,and only those who do not dread the fatiguing climb of gaining its numinous summits . (Karl Marx, German revolutionary )
在科学上没有平坦的大道，只有不畏劳苦沿着其崎岖之路攀登的人，才有希望达到它光辉的顶点。( 德国革命家 马克思. K .)
点评:这个项目需要整合的资源比较多,虽然我占有技术,但是其他的还只能靠有实力的合作者协助.
