第五章 各种显微镜检术介绍
前面讲述了显微镜的光学原理以及附件，下面将分类介绍一下各类研究用镜检术。在生物研究领域，透射式明场显微镜得到广泛应用，在此基础上各种特殊的镜检方法也得到应用，如相衬，荧光，干涉，暗场，这些镜检方法在高档显微镜上均能同时实现。
第一节 正立式显微镜
一． 明视野观察（Bright field）
明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式，广泛应用于病理、检验，用于观察被染色的切片，所有显微镜均能完成此功能。在此不再赘述。
二． 暗视野观察（Dark field）
暗视野实际是暗场照明。它的特点和明视野不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。因此，视场成为黑暗的背景，而被检物体则呈现明亮的像。
暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现像，微尘在强光直射通过的情况下，人眼不能观察，这是因为强光绕射造成的。若把光线斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了体积，为人眼可见。
暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射的光形成明亮图像。暗视野观察的分辨率远高于明视野观察，最高达0.02—0.004mm。
三．相衬镜检法（Phase contrast）
在光学显微镜的发展过程中，相衬镜检术的发明成功，是近代显微镜技术中的重要成就。我们知道，人眼只能区分光波的波长（颜色）和振幅（亮度），对于无色通明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时很难观察到标本。
相衬显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效地利用光的干涉现像，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。这大大便利了活体细胞的观察，因此相衬镜检法广泛应用于倒置显微镜。
相衬镜检法在装置上与明场不同，有一些特殊要求
1． 环状光阑（Ring slit）： 装在聚光镜的下方，而与聚光镜组合为一体——相衬聚光镜。它是由大小不同的环形光阑装在一圆盘内，外面标有10X、20X、40X、100X等字样，与相对应倍数的物镜配合使用。
2． 相板（Phase plate）： 装在物镜的后焦平面处，它分为两部分，一是通过直射光的部分，为半透明的环状，叫共轭面；另一是通过衍射光的部分，叫“补偿面”。有相板的物镜称“相衬物镜”，外壳上常有“Ph”字样。
相衬镜检法是一种比较复杂的镜检方法，想要得到好的观察效果，显微镜的调试非常重要。除此之外还应注意以下几个方面。
1． 光源要强，全部开启孔径光阑；
2． 使用滤色片，使光波近于单色；
四．微分干涉相衬镜检术（Differential interference contrast DIC）
微分干涉相衬镜检术出现于60年代，它不仅能观察无色透明的物体，而且图像呈现出浮雕壮的立体感，并具有相衬镜检术所不能达到的某些优点，观察效果更为逼真。
1．原理
微分干涉相衬镜检术是利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等，光束分别在距离很近的两点上通过被检物体，在相位上略有差别。由于两光束的裂距极小，而不出现重影现像，使图像呈现出立体的三维感觉。
2．微分干涉相衬镜检术所需的特殊部件：
（1） 起偏镜
（2） 检偏镜
（3） 渥拉斯顿棱镜2 块
3．微分干涉镜检时的注意事项
（1）因微分干涉相衬灵敏度高，制片表面不能有污物和灰尘。
（2）具有双折射性的物质，不能达到微分干涉相衬镜检的效果。
（3）倒置显微镜应用微分干涉相衬时，不能用塑料培养皿。
